Wpływ estrogenu na Pseudomonas Mucoidy i zaostrzenia w mukowiscydozie AD 2

Testowane laboratoryjnie
Szczegółowe informacje dotyczące szczepu 01 P. aeruginosa (PA01), 24 izolatów klinicznych, warunków hodowli, bronchoskopii, hodowli komórkowej, ilościowego testu odwrotnej transkryptazy-reakcji łańcuchowej polimerazy, sekwencjonowania DNA fenotypu P. aeruginosa, 25 i testy katalazy, nadtlenku wodoru, alginianu, 26 i estradiolu podano w Dodatku uzupełniającym, dostępnym wraz z pełnym tekstem tego artykułu pod adresem.
Pacjenci
Od lipca 2008 r. Do lipca 2010 r. Zwerbowaliśmy wszystkie pacjentki z mukowiscydozą, które zgłosiły się do szpitala Beaumont w Dublinie (44), w sumie 139 zaostrzeń infekcyjnych, zgodnie z kryteriami Fuchsa i wsp.27 (tabela S3 w Dodatku Dodatek). Wszyscy pacjenci wyrazili pisemną, świadomą zgodę, a odpowiednia zgoda została uzyskana od instytucjonalnej komisji szpitalnej.
Analiza statystyczna
Dane analizowano za pomocą metod i metod opisowych, eksploracyjnych (porównawczych) oraz modelowania, w tym techniki generowania liczb losowych. Wszystkie wyniki są wyrażone jako liczby bezwzględne i procenty, jak również średnie ? SD lub średnie ? SE. Użyliśmy testu chi-kwadrat lub dokładnego testu Fishera, aby porównać kategoryczne rozkłady danych i metody Kolmogorova-Smirnowa lub Shapiro-Wilka, w razie potrzeby, w celu przetestowania ciągłych danych dla normalności rozkładu. Zastosowaliśmy metody parametryczne i testy (np. Test t Studenta) do analizy normalnie rozproszonych danych i dwu-grupowych nieparametrycznych testów Wilcoxona i Manna-Whitneya do analizy danych odbiegających od rozkładu normalnego. Użyliśmy nieparametrycznego testu Kruskala-Wallisa do porównania więcej niż dwóch niezależnych grup. Aby opisać istniejące trendy liniowe na przestrzeni lat, obliczyliśmy współczynniki modeli (przechwycone, nachylenia i kwadraty współczynnika korelacji [R2]). Analizy statystyczne przeprowadzono za pomocą oprogramowania SPSS, wersja 18 (IBM); GraphPad Prism, wersja 4.0 (oprogramowanie GraphPad); i narzędzia do modelowania zintegrowane z programem Microsoft Office Excel 2007, wersja SP2 MSO (Microsoft). Wszystkie podane wartości P są dwustronne, a wartość P równą 0,05 uważano za wskazującą istotność statystyczną, o ile nie podano inaczej.
Wyniki
Wpływ estrogenu na produkcję alginianu
Figura 1. Figura 1. Wytwarzanie alginianu i przekształcanie mułu w Pseudomonas aeruginosa indukowane przez estradiol i estriol. W panelu A szczepy kliniczne P. aeruginosa 01 (PA01) lub P. aeruginosa klinicznie izolowano od pacjentów z i bez mukowiscydozy (CF) przez 3 lub 4 tygodnie codziennej subkultury w świeżym bulionie zawierającym etanol, testosteron, estradiol lub estriol (10 nM dla każdej subkultury). Alginian mierzono za pomocą metody reakcji karbonylolu uronowego w trzech eksperymentach. Dane wyrażono jako średnie, przy czym słupki T wskazują odchylenie standardowe. Gwiazdka wskazuje P <0,05 dla porównania z etanolem lub testosteronem; sztylet wskazuje P <0,01 dla porównania między 3 a 4 tygodniami leczenia estradiolem w PA01. Poziomy alginianu nie zostały określone w PA01 w 4 tygodniu w odpowiedzi na estriol lub w CF i izolaty inne niż CF w 3 dni w odpowiedzi na testosteron. W panelu B PA01 wysiano na niebieski agar po codziennej subkulturze przez 4 tygodnie w świeżych hodowlach bulionowych zawierających etanol (kontrola nośnika), estradiol lub testosteron (10 nM każdej substancji). Reprezentatywne płytki hodowlane pokazano dla trzech eksperymentów. Śluzowate kolonie zaznaczono strzałkami.
Na początku poziom PA01 jest niemukocytem. Jednak w odpowiednich warunkach można go wywołać w celu wytworzenia alginianu.24,28 Badaliśmy wpływ estradiolu i estriolu na wytwarzanie alginianu w PA01 oraz w izolatach klinicznych P. aeruginosa uzyskanych od pacjentów zi bez mukowiscydozy (ryc. 1A) . Jako kontrolę zastosowano testosteron (prekursor estradiolu) i etanol. Po 3 dniach ekspozycji, 10 nM estradiolu indukowało więcej wytwarzania alginianu przez PA01 (33,5 ?g na mililitr) niż te same ilości testosteronu (9,6 ?g na mililitr) i etanolu (9,5 ?g na mililitr) (P <0,05 dla obu porównań). ). Wzrost wytwarzania alginianu był zależny od czasu, przy zwiększonych poziomach (92,2 ?g na mililitr) wytworzonych po 4 tygodniach w ciągłej subkulturze z estradiolem (P <0,01 dla obu porównań). Testosteron nie miał wpływu na produkcję alginianu w 4 tygodnie. Po 3 dniach estriol indukował znacznie więcej produkcji alginianu (143,1 ?g na mililitr) niż równą ilość estradiolu (P <0,005) [patrz też: gastrolog rzeszów, dobry endokrynolog kielce, Stetoskopy dla lekarzy ]