Case-Control Badanie wirusa brodawczaka ludzkiego i raka jamy ustnej i gardła ad

Silne dane epidemiologiczne zapewniłyby dodatkowe wsparcie dla związku przyczynowego między rakiem HPV a rakiem jamy ustnej i gardła i mogłyby stanowić przewodnik dla przyszłych programów profilaktyki raka, obejmujących szczepienia, aby zapobiec zakażeniu ustnego zakażenia HPV lub skriningowi w celu jego wykrycia. Metody
Pacjenci
Nasze badanie kliniczno-kontrolne zostało zagnieżdżone w ramach długoterminowego badania kohortowego pacjentów ze świeżo zdiagnozowanymi raków płaskonabłonkowych głowy i szyi w ambulatoryjnej klinice otolaryngologii w szpitalu Johns Hopkins w Baltimore w latach 2000-2005. Kwalifikujący się pacjenci obejmowali pacjentów z potwierdzona diagnoza raka płaskonabłonkowego jamy ustnej i gardła.
Tabela 1. Tabela 1. Zmienne objaśniające dla pacjentów z rakiem nerkowokomórkowym i pacjentami kontrolnymi. Grupę kontrolną stanowiły pacjenci bez choroby nowotworowej w wywiadzie, którzy w latach 2000-2005 byli obserwowani w łagodnych schorzeniach w tej samej klinice, z której zostali włączeni pacjenci (Tabela 1). Po włączeniu do badania zakwalifikowano pacjentów spełniających kryteria w ramach tej samej płci i w wieku 5 lat do momentu, aż dwóch pacjentów z grupy kontrolnej indywidualnie dopasowano do każdego pacjenta. Protokół badania został zatwierdzony przez instytucjonalną komisję rewizyjną szpitala Johns Hopkins. Pisemną świadomą zgodę uzyskano od wszystkich pacjentów.
Zbieranie danych
Próbki pobierano od pacjentów w przypadku przed rozpoczęciem leczenia i od pacjentów kontrolnych przy przyjęciu. Próbki z błony śluzowej zebrano za pomocą płukania doustnego solą fizjologiczną i od 5 do 10 pociągnięć szczotki cytologicznej (doustne CDx, CDx Laboratories) na ścianie tylnej jamy ustnej gardła. Próbki surowicy zebrano i przechowywano w temperaturze -80 ° C. W przypadku pacjentów z przypadkami uzyskano próbki nowotworu utrwalone w formalinie, zatopione w parafinie i, jeśli to możliwe, natychmiastowe zamrożone świeże próbki nowotworu w celu wykrycia HPV.
Wszyscy pacjenci ukończyli audio, wspomagane komputerowo, udzielone samemu wywiadowi, który uzyskał informacje na temat cech demograficznych, higieny jamy ustnej, historii medycznej, historii raka, zachowań seksualnych w ciągu życia oraz historii używania marihuany, tytoniu i alkoholu (patrz Dodatek Dodatek, dostępny wraz z pełnym tekstem tego artykułu na stronie www.nejm.org).
Badania laboratoryjne
Hybrydyzacja In Situ dla wykrywania HPV-16
Szukaliśmy HPV-16 w utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie guzach od wszystkich pacjentów z przypadkami, stosując amplifikację sygnału katalitycznego z hybrydyzacją in situ do biotynylowanych sond (Dako GenPoint) .15 Status nowotworu HPV-16-pozytywny został zdefiniowany jako swoiste barwienie jąder komórek nowotworowych dla HPV-16.
Oczyszczanie i analiza DNA
DNA z próbek jamy ustnej16 i świeżo zamrożonych guzów17 z podgrupy pacjentów indywidualnych oczyszczono jak opisano poprzednio. Próbki nowotworu były mikrosadzone, aby zapewnić, że ponad 70% próbki stanowiło DNA z guza.
Przeanalizowaliśmy oczyszczony DNA dla 37 typów HPV za pomocą testu multipleksowej reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) ukierunkowanego na region L1 genomu wirusowego, przy użyciu zestawów starterów PGMY09 / 11 L1 i starterów dla .-globiny, a następnie hybrydyzacji. na liniowy układ sond (Roche Molecular Systems) .18 Obciążenie wirusa HPV-16 w oczyszczonym DNA z próbek błony śluzowej jamy ustnej i świeżo zamrożonych próbek nowotworu określono przy użyciu czułego testu PCR w czasie rzeczywistym, ukierunkowanego na kodowanie E6. region.16,19 Obciążenie wirusowe zgłoszono dla próbek dodatnich (tych z .1 kopii wirusa) i dostosowano do całkowitej liczby ludzkich komórek testowanych przy użyciu testu PCR w czasie rzeczywistym, skierowanego do pojedynczej kopii ludzki gen (dla endogennego retrowirusa 3, ERV3) .16
Analiza serologiczna
Przeciwciała surowicy przeciwko białku LI HPV-16 wykryto za pomocą testu immunoenzymatycznego (ELISA) opartego na cząstkach wirusopodobnych. 20 Przeciwciała przeciw onkoproteinom E6 i E7 HPV-16 wykryto przy użyciu testu ELISA i bakterii. wyrażone pełnej długości E6 lub E7 jako antygen
Analiza statystyczna
Skumulowane spożycie alkoholu obliczono następująco
[patrz też: usg kończyn dolnych, dobry endokrynolog kielce, badania do celów sanitarno-epidemiologicznych ]